CELESTA-Lichtquelle von Lumencor für Konfokal-Mikroskopie
Die Integration eines gepoolten CRISPR-Genscreenings mit zellulären und subzellulären Bildgebungsdaten ist entscheidend für die Verbesserung der phänotypischen Definition in bildbasierten genetischen Knockout-Studien. In einem in Nature Methods [1] veröffentlichten Artikel beschreiben Wheeler und Mitarbeiter das Screening von CRISPR-infizierten HEK293T-Zellen auf Microraft-Arrays und die anschließende automatisierte hochauflösende konfokale Bildgebung zur Identifizierung von Regulatoren von Stressgranula, bei denen es sich um punktförmige Protein-RNA-Ansammlungen handelt, die sich bei zellulärem Stress bilden. Microraft-Arrays (erhältlich bei Cell Microsystems; Durham, USA) sind eine attraktive Plattform für das Screening masseninfizierter Zellen, da Tausende von klonalen Zellkolonien (~5-20 Zellen pro Kolonie) isoliert voneinander kultiviert werden können.
Die konfokale Bildgebung von Microraft-Arrays wurde mit einer »CELESTA-Lichtquelle durchgeführt, die mit einem CrestOptics X-Light V2 L-FOV Spinning-Disk-Konfokal gekoppelt war. Die 405 nm-, 520 nm-, 546 nm- und 638 nm-Linien der CELESTA-Lichtquelle wurden zur Anregung der Fluoreszenz von DAPI, mCitrine, mCherry bzw. Alexa Fluor 633 verwendet. Bei dem Screening wurden sechs bereits bekannte Stressgranulat-Modulatoren sowie 17 RNA-bindende Proteine (RBPs) identifiziert und validiert, die, wenn sie abgereichert werden, die durch Natriumarsenit ausgelösten Stressgranula in menschlichen Zellen reduzieren.
Kontaktieren Sie AHF analysentechnik für weitere Informationen über Lichtquellen von Lumencor, Inc.
Referenz:
[1] EC Wheeler, AQ Vu, GW Yeo et al